Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出新现肾脏自身病原微到再次出新现1型号癌症针灸副作用的困难重重领军在成年人时期就有很好的描绘出新，多个肾脏自身病原微阴性的成年人之中亦有70%在血清转换后10年内中风癌症，而随访15年的成年人这一数量减小到84%。相对来说来说之下，分之一针灸1型号癌症一半以上的型号1型号癌症的得病必要还不会取得充份的研究者。

越来越多的人开始用作分期中系统来下定义1型号癌症的困难重重：个微在再次出新现多种肾脏自身病原微时转到第1期中，再次出新现血糖异常时转到第2期中，再次出新现副作用时转到第3期中。一些多发肾脏自身病原微阴性的个微，在1期和2期，困难重重较快，并发展为得病的1型号癌症。我们早先描绘出新了四四组在首次扫描到多种肾脏自身病原微检验后将近10年无癌症的总括快困难重重者，这四组病症人数少，但形态非常明确。随后，我们注意到肾脏自身肝细胞特异性CD8+T线或粒微加成在困难重重缓快的病症之中基本不假定，但在近期得病和仍然假定的癌症病症之中很不易扫描到。这或许说明，与困难重重病症相对来说来说，这些病症自身免疫加成的可调增强。

早期研究者说明，尽管可调性T线或粒微(Treg)数量正常，但癌症病症假定一些机能缺陷，其之中包含对IL-2的加成能力降低。此外，癌症病症之中的波动CD4+T线或粒微或许对可调更加具抵抗性，发挥为波动T线或粒微的消除消散，自然现象产生的Treg和微外产生的诱导Treg，以及肝细胞境况的CD4+T线或粒微之中IL-2加成消散。本研究者的旨在是描绘出新了CD4+可调性T线或粒微(Treg)在一小群总括缓快困难重重者之中的形态，他们的平均中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以许多人为基础的横向研究者，在21岁请注意确诊的病症亲属之中检查1型号癌症的危险因素。我们早先描绘出新了仍然缓快困难重重者的形态，他们保证多重肾脏自身病原微阴性超过10年，但不会再次出新现癌症的针灸副作用，快性或非进行时性自身免疫。随后，10名之前保证无癌症并希望提供大量血液检验的缓快困难重重者划入T和B线或粒微机能归纳。在目前的研究者之中，8名快困难重重者(SP四组)，之中位中年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身病原微阴性。所有的与会者都正处于1型号癌症困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身病原微对某些肝细胞的阴性加成，然而，一名病症现在正处于2期将近6年，但不会再次出新现针灸副作用，一名病症被诊断为癌症，该病人72岁，在收集科学实验检验时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在的测试之中对该遗传物质进行时了单独审核。复合外周血单个氢线或粒微(PBMCs)，采用多参数流式线或粒微练成和T线或粒微消除次测试审核遗传物质之中Treg的频领军、特异性号和机能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类氢对、相关联和回归)进行时无统筹聚类归纳，审核Treg特异性号。

结果：与有益遗传物质相对来说来说，来自快困难重重微的遗忘CD4+T线或粒微的统筹聚类推测，激来时的遗忘CD4+ Treg频领军减小，与糖皮质激素诱导的TNFR相关复合物(GITR)解读减小有关。一名HbA1c上升时的病症与困难重重缓快者和匹配的准确领军相对来说来说，Treg明人有所不尽相同。机能归纳说明，与有益遗传物质相对来说来说，来自缓快困难重重微的Treg内皮细胞的CD4+波动T线或粒微消除值得注意受损。发挥为对波动CD4+T线或粒微CD25和CD134解读的消除减小。

三幅1 深入的特异性号归纳推测，CD4+Treg病毒性号在快困难重重队列之中减小。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有遗传物质的来时CD4+CD45RA -线或粒微上。根据标示出新物解读氢对出新10个元簇:遗忘T线或粒微_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T线或粒微;HLA-DR + GITR +遗忘T线或粒微;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个不尽相同Treg标示出新生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个协同(100个协同)，更加大的元协同(10个元协同)在节点四组四周打磨。每个节点之中的饼三幅透露单个标示出新的解读级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整微标示出新解读。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成三幅，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说原子量为每个metacluster筒线或三幅(原子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T线或粒微(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T线或粒微(l)。紫色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配大写秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用作CITRUS的相非常号确认，Treg频领军的减小是困难重重缓快的标志。分级相关联(a - f)和柑橘归纳(g-k)非常SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T线或粒微上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的民族特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行时复合，虚拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及遗传物质SP 606(紫色)之中CD25+ cd127的频领军统计三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的筒线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，左下角突出新的簇被识别系统为SP和HD队列错综复杂的不尽相同。(j)筒线或三幅推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说原子量(数量)。(k)直方三幅推测每个簇的特异性号(粉红色)和Treg标示出新相对来说解读与背景解读(粉红色);上列，寄存器Treg_3;示意三幅一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇之中标示出新的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配大写秩检验

三幅3 与有益献血者相对来说来说，困难重重缓快者遗忘treg的GITR减小。每个遗忘CD4+T线或粒微元簇(遗忘T线或粒微_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T线或粒微;HLA-DR + GITR +遗忘T线或粒微;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标示出新的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热三幅(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(紫色)、所有SP(粉红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方三幅(c)和统计三幅(d)。Wilcoxon匹配大写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有遗传物质包含，p< 0.05(粉红色)遗传物质SP 606和匹配的HD不包含在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR解读，从分级相关联，从所有HD(紫色)、所有SP(粉红色)和SP 606(紫色)串联，推测直方三幅(e)和统计三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配大写秩检验

三幅4 来自缓快困难重重的CD4+ treg线或粒微控制波动CD4+T线或粒微的能力降低。SP四组用粉红色的线或和白点透露，HD四组用粉红色的线或和白点透露，紫色的线或/白点透露遗传物质sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒微进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被标示出新为CFSE, Treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠来时化线或粒微，培育出3过后进行时流式线或粒微练成扫描。(a-d)与CD4+转发者相对来说应的treg培育出(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育出。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用作阴性相非常(激来时的四组织起来线或粒微不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

三幅5 波动CD4+T线或粒微对缓快困难重重的T线或粒微来时化的消除更加敏感。SP四组用粉红色的线或和白点透露，HD四组用粉红色的线或和白点透露，紫色的线或/白点透露遗传物质sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒微进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示出新，treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠来时化线或粒微，培育出3过后进行时流式线或粒微练成(CD25反染)和线或粒微因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606转发者协力培育出。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE消除百分领军(b)。(c,d) CD25消除百分领军(c)和CD134消除百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出之中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们断定的结论是，来自缓快困难重重子的来时化遗忘CD4+Treg在GITR解读之中取得了扩张和丰富，突显了进一步研究者Treg在1型号癌症可能会个微之中的异质性的实质。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28